Ensino em tempos de pandemia: adaptações a um grande desafio

Prezados leitores, Desde que recebi o convite para ser editora científica da revista Vigilância Sanitária em Debate: Sociedade, Ciência & Tecnologia (Health Surveillance under Debate: Society, Science & Technology) ­ Visa em Debate, tenho direcionado muita atenção para o fortalecimento da revista como potencial veículo de disseminação de conhecimento em Vigilância Sanitária. As áreas de pesquisa e desenvolvimento tecnológico têm caminhado intrinsecamente, porém outras, como a educação e a formação profissional em Vigilância Sanitária, necessitam de muita promoção e projetos que possibilitem essa formação.

Métodos alternativos para determinação da potência de veneno e antiveneno botrópico: aplicações e perspectivas para o controle da qualidade / Alternative methods for potency evaluation for Bothrops venom and antivenom: applications and perspectives for quality control

Introdução: Acidentes com animais peçonhentos são classificados como doenças tropicais negligenciadas e são atualmente a mais frequente causa de intoxicação em humanos no Brasil. O único tratamento disponível é a rápida administração de antivenenos específicos e de qualidade garantida. Para assegurar a eficácia e a segurança desses produtos, são realizados ensaios de determinação da potência in vivo para veneno e antiveneno, desde as etapas de produção até sua liberação final. Apesar dos diversos estudos sobre métodos   alternativos ao ensaio murino, nenhum método foi efetivamente validado. Objetivo: Compilar os métodos alternativos desenvolvidos para os antivenenos botrópicos, avaliando sua disponibilidade, perspectivas e aplicações em laboratórios de produção e controle da qualidade. Método: Foi realizada uma busca nas bases PubMed, BVS e Scopus entre novembro de 2021 e junho de 2022. Foram identificados 89 trabalhos, dos quais 31 foram selecionados de acordo com os critérios de elegibilidade. Resultados: Nos métodos alternativos identificados, observamos a preferência de 42,80% dos estudos por metodologias que utilizem linhagens celulares como método alternativo aos ensaios murinos, sendo que a maioria destes trabalhos 58,30% optou pela linhagem celular Vero. Conclusões: Pela diversidade das toxinas encontradas em cada gênero de serpentes, entende-se que é de extrema importância que o ensaio de potência dos antivenenos tenha como base a avaliação e a quantificação precisa da inibição da atividade biológica dos venenos. Ensaios de citotoxicidade são amplamente utilizados e têm acumulado evidências de sua adequação como importante ferramenta alternativa ao ensaio murino para o controle da qualidade de veneno e antiveneno antibotrópico.

Introduction: Accidents with venomous animals are classified as neglected tropical diseases and are currently the most frequent cause of intoxication in humans in Brazil. The only available treatment is the rapid administration of specific, quality-assured antivenoms. To ensure the efficacy and safety of these products, in vivo potency determination tests for venom and antivenom are performed during the production stages, until final release. Despite several studies on alternative methods to the murine assay, no method has been effectively validated. Objective: To compile alternative methods developed for Bothrops antivenoms, assessing the availability of the methods and the prospects and applications in Bothrops venom and antivenom production and quality control laboratories. Method: A search was conducted in PubMed, BVS, and Scopus databases between November 2021 and June 2022. 89 articles were identified, of which 31 were selected according to the eligibility criteria. Results: We observed in the alternative methods identified a preference of 42.80% of the studies for methodologies that use cell lines as an alternative method to the murine assays, and most of these works (58.30%) opted for a VERO cell line. Conclusions: Due to the diversity of toxins found in each genus of snakes, it is understood that the potency assay for antivenoms should be based on the evaluation and precise quantification of the inhibition of biological activity of venoms. Cytotoxicity assays are widely used and have been accumulating evidence of their suitability as an important alternative tool to the murine assay for quality control for Bothrops venom and antivenom.

Initial survey on the use of animals in scientific research and teaching reveals divided opinion of the Brazilian population / Investigação inicial sobre o uso de animais na pesquisa científica e no ensino revela opinião dividida da população brasileira

ABSTRACT Objective: Specific legislation regulating the use of animals in research in Brazil was introduced in 2008. However, the viewpoint of the Brazilian population regarding the use of animals in research and teaching activities remains largely unknown. Investigation of the public viewpoint on and understanding of the topic is required given the current shifts in the animal ethics scenario in Brazil. The objective of this study was to provide the first insight into the Brazilian population viewpoint on the use of animals in scientific research and teaching activities. Methods: Data collected in a survey involving 2,115 individuals aged 16 years or older and residing in 130 municipalities distributed across the five Brazilian macroregions (North, Northeast, South, Southeast, and Midwest) were analyzed. The margin of error for entire sample was set at 2%, with a 95% confidence interval. Results: This survey revealed that most Brazilian citizens are in favor of the use animals in research, particularly for medical purposes. Different views depending on the nature of research were identified. Approximately 80% of respondents were also in favor of frequent oversight of laboratories and animal facilities. Conclusion: Survey findings indicate that the opinion of the Brazilian population is divided when it comes to the use of animals in scientific research and teaching. Divided opinions expose a limited understanding of the importance of basic sciences and emphasizes the need for improved communication between the scientific community and the general population. Further strategies aimed to promote animal welfare are discussed.

RESUMO Objetivo: A legislação específica que regula o uso de animais em pesquisa no Brasil foi introduzida em 2008. No entanto, a opinião da população brasileira sobre o uso de animais em atividades de pesquisa e ensino ainda é desconhecida. No atual cenário brasileiro em mudança com relação à ética animal, é necessário avaliar as visões e o conhecimento da população sobre o assunto. O objetivo deste destudo foi realizar o primeiro levantamento da opinião da população brasileira sobre o uso de animais em atividades de ensino e pesquisa científica. Métodos: Analisamos os resultados de uma pesquisa com 2.115 indivíduos com 16 anos ou mais de 130 municípios das cinco macrorregiões brasileiras (Norte, Nordeste, Sul, Sudeste e Centro-Oeste). A margem de erro para toda a amostra foi de 2% dentro de um intervalo de confiança de 95%. Resultados: A pesquisa revelou que a maioria da população brasileira era favorável ao uso de animais em pesquisas, principalmente para fins médicos. Diferentes pontos de vista, dependendo da natureza da pesquisa, também foram identificados. Além disso, aproximadamente 80% dos entrevistados eram favoráveis ao monitoramento frequente de laboratórios e instalações de animais. Conclusão: A opinião da população brasileira está dividida com relação ao uso de animais em pesquisa e ensino científicos. Essa divisão expõe um entendimento limitado da importância das ciências básicas e destaca a necessidade de uma melhor comunicação entre a comunidade científica e a população em geral. Outras ações para alcançar as melhorias desejadas no bem-estar animal são discutidas.

The chick embryo chorioallantoic membrane assay as a model for the study of angiogenesis / Ensaio da membrana corioalantóide de embrião de galinha como modelo para o estudo da angiogênese

Angiogenesis is a fundamental physiological process with strong implications in tissue homeostasis. Animal models helping to identify how angiogenesis is regulated are fundamental to answer many biological questions. Chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) assay is one of the most employed methods to study angiogenesis. In this study we applied a scientometric approach to evaluate the employment of CAM assay in published articles. Temporal trends indicated that CAM assay was the preferred method to investigate angiogenesis over time. The publications had a significant number of citations and the impact factor of journals publishing articles is relevant for the scientific community. A total of 52 different research areas have articles published using this particular technique. Oncology is the research field in which CAM assay was mostly used. Accordingly, tumor-derived cell lines were the most frequent sample tested on CAM. We also identified that 73,6% of articles published used only CAM assay to answer questions concerning angiogenesis. We concluded that although the CAM assay is a classical approach, that does not need so much infrastructure and financial support to be performed, it is a well-accepted technique by the scientific community. In addition, this methodology has gain attention in scientific community because no pain is experienced by the chick and they are minor ethical concerns to employ this method. Moreover, this data can help researchers who are unfamiliar with the CAM assay to identify if this particular method is suitable for their research.

A angiogênese é um processo fisiológico fundamental com fortes implicações na homeostase tecidual. Modelos animais que ajudam a entender como a angiogênese é regulada, são fundamentais para responder a muitas questões biológicas. O ensaio de membrana corioalantóide de embrião de galinha (CAM) é um dos métodos mais empregados para estudar a angiogênese. Neste estudo foi aplicada uma abordagem cientométrica para avaliar o emprego do ensaio CAM em artigos científicos já publicados. Tendências temporais indicaram que o ensaio CAM foi o método mais usado para investigar a angiogênese ao longo do tempo. Os artigos científicos que usaram a metodologia CAM foram publicados em periódicos com significativos números de citações e fator de impacto. No total 52 diferentes áreas de conhecimento usaram a técnica CAM, sendo a oncologia o campo o qual produziu maior número de artigos usando essa metodologia. Consequentemente o material biológico mais testado foi as linhagens celulares tumorais. Também foi identificado que 73,6% dos artigos publicados utilizaram apenas o teste CAM para responder questões relacionadas à angiogênese. Pode se concluir que embora o ensaio CAM seja uma abordagem clássica, que não necessita de muita infraestrutura e apoio financeiro para ser realizado, é uma técnica bem aceita pela comunidade científica. Além disso, esta metodologia tem ganhado atenção na comunidade científica porque os animais testados não sofrem dor e por essa razão esse modelo experimental exige mínimas preocupações éticas. Além disso, esses dados podem ajudar os pesquisadores que não estão familiarizados com o ensaio CAM a identificar se esse método específico é adequado para sua pesquisa.

Aplicabilidade de métodos alternativos no monitoramento da qualidade microbiológica da água tratada para diálise / Applicability of alternative methods for the monitoring microbiological quality of treated water for dialysis

A fim de garantir a qualidade final de produtos os laboratórios de análise microbiológica fornecem dados sobre a qualidade dos mesmos em todas as suas etapas de produção. A crescente preocupação com a saúde dos pacientes conduz à busca de métodos que forneçam resultados precisos e rápidos, pois possibilitam que ações corretivas sejam tomadas em tempo real. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de tecnologia alternativa no monitoramento de endotoxina bacteriana na água tratada para diálise e dialisato e avaliar o potencial da citometria de fluxo na análise de água. Para isso utilizou-se Portable Test System (PTS®) como método alternativo para detecção de endotoxina bacteriana no monitoramento da água tratada para diálise e dialisato, o qual foi validado frente ao método convencional farmacopeico. Paralelamente realizou-se revisão narrativa da literatura a fim de avaliar a aplicabilidade da citometria de fluxo em análises de água. A análise dos diferentes parâmetros de validação para endotoxina bacteriana no método alternativo mostrou que, exceto para a menor diluição analisada, houve linearidade e precisão nos resultados. Por outro lado a concentração de 0,25 UE/mL foi a menor que apresentou exatidão e especificidade. Observou-se ainda, que o limite de detecção foi de 0,125UE/mL e o de quantificação de 0,25 UE/mL, portanto o intervalo foi de 0,25-1,0 UE/mL. Adicionalmente pela análise de resistência pode-se perceber que ao variar analistas não houve diferença significativa. Em relação ao tempo de análise em uma condição de rotina laboratorial com muitas amostras, o PTS® mostrou-se demorado. Ressalta ainda, que seria importante que a legislação vigente determinasse a análise mensal de endotoxinas no dialisato. A revisão da literatura evidencia o potencial da tecnologia de citometria de fluxo, pois a mesma mostrou-se satisfatória quando comparada a metodologias convencionais para análise de água. O trabalho desenvolvido permitiu concluir que o PTS®) mostrou-se adequado para analisar amostras in loco, permitindo análises em tempo real, que para as quais haja a expectativa de ausência de endotoxinas ou de concentração respeitando o intervalo de 0,25 UE/mL a 1,0 UE/mL. Quanto a citometria de fluxo, esta mostrou-se uma tecnologia promissora em analisar amostras de água, sendo portanto recomendável proceder a estudos de validação e aplicabilidade

In order to guarantee the final quality of products, the microbiological analysis laboratories provide data about their quality at all production stages. The growing concern for patients' health leads to the search for methods that provide accurate and fast results, as they enable corrective actions to be taken in real time. The present work aimed to evaluate the alternative technology potential in the monitoring of bacterial endotoxin in treated water for dialysis and dialysate and to evaluate the potential of flow cytometry in water analysis. The different validation parameters analysis for bacterial endotoxin in alternative method showed that, except for the lowest dilution analyzed, there was linearity and precision in the results. On the other hand, the concentration of 0.25 EU / mL was the lowest that presented accuracy and specificity. It was further observed that the detection limit was 0.125UE / mL and the quantification limit was 0.25 EU / mL, so the range was 0.25-1.0 EU / mL. Additionally by the ruggedness analysis it was possible to perceived that when varying analysts there was no significant difference. Regarding the analysis time in a laboratory routine condition with many samples, the PTS® was was time consuming. It was also observed that it would be important to determine monthly analysis of endotoxins in dialysate. The literature review evidence the flow cytometry technology potential of the because it was satisfactory when compared to conventional methodologies for water analysis. The research showed that the PTS® was suitable for analyzing samples in loco, allowing real-time analyzes, for which there is expectation of endotoxins absence or concentration respecting the range of 0.25 EU / mL to 1.0 EU / mL. For the flow cytometry, it was shown to be a promising technology for analyzing water samples, and it is therefore advisable to carry out validation and applicability studies

Métodos alternativos como parte de las nuevas tendencias en el control de calidad de vacunas / Alternative methods as part of the new trends in vaccine quality control

El control de calidad de las vacunas resulta fundamental para las actividades de producción, liberación lote a lote y comercialización de las vacunas. Sin embargo, en la actualidad este es un proceso que por su concepción es lento y costoso debido a que se apoya en la realización de extensas pruebas en animales para demostrar la potencia y seguridad de estos productos biológicos. El desarrollo de métodos alternativos inspirados en el principio de las 3Rs (Reducción, Refinamiento y Reemplazo) constituye una tendencia que debe impactar de manera muy significativa en la reducción de los tiempos de liberación y el costo del proceso de control de calidad de vacunas en los próximos años. En particular la sustitución de las pruebas de potencia y toxicidad in vivo por procedimientos alternativos más relevantes, rápidos, exactos, reproducibles, robustos y baratos, que incluyen la serología, la cuantificación directa de antígeno, los ensayos en cultivos celulares y el enfoque a consistencia, por solo mencionar algunos; implica un cambio de paradigma, con indiscutibles repercusiones éticas, logísticas, económicas y científico-técnicas, para el aseguramiento de los parámetros de calidad de los inmunobiológicos con el mejor balance costo-beneficio: las vacunas. Los fundamentos técnicos de estos métodos alternativos, sus ventajas y nivel de implementación a nivel internacional, así como sus principales limitaciones, son abordados en este trabajo(AU)

Vaccine quality control is crucial for the manufacturing, lot release and commercialization activities worldwide. However, the current process is by-design too slow and expensive because is based on large animal assays for assuring the potency and safety of these important biological products. The development of 3Rs alternative methods (Reduction, Refinement and Replacement) is a trend able to significantly reduce the releasing times and costs of the vaccine quality control processes in the next few years. Particularly, the replacement of the animals-based potency and toxicity assays by alternative procedures more relevant, fast, accurate, reproducible and cheap, including serology, direct antigen quantification, cell culture tests and the Consistency Approach, for just mentioning some of them, implies a paradigm shift, with undisputable ethical, logistical, economic, scientific and technical repercussions for ensuring the vaccine quality parameters. Theoretical basements, advantages and implementation levels of the alternatives methods as well as their main limitations are presented in this paper(AU)

Desenvolvimento de pele humana reconstruída contendo equivalente dérmico glicado na avaliação da eficácia e toxicidade de compostos anti-glicação / Development of reconstructed human skin containing glycated dermal equivalent to toxicity and efficacy tests of anti-glycation compounds

A glicação não enzimática das proteínas é um fator comum para a fisiopatologia de uma série de transtornos relacionados ao envelhecimento e a doenças como o diabetes mellitus (DM). O geração dos produtos de glicação, os AGEs (do inglês: Advanced Glycation End Products) se dá através de reações de glicação da mariz extracelular (MEC) na derme e têm sido apontado como um dos fatores responsáveis pela perda de elasticidade e deficiência de cicatrização da pele. A permeação cutânea de compostos anti-AGE é uma limitação importante para eficiência terapêutica de compostos que devem atingir camadas mais profundas da pele. Modelos de pele reconstruída contendo equivalente dérmico glicado são estruturas tridimensionais geradas in vitro que mimetizam a pele humana e representam um eficiente modelo para o estudo de células e modificações provocadas na MEC no processo de envelhecimento e DM. O modelo 3D de pele reconstruída tem características metabólicas, de permeabilidade e atividade semelhantes à da pele original, potencializando seu papel nas investigações sobre permeabilidade de drogas, toxicidade, irritação, eficácia e segurança de compostos e diferenciação de queratinócitos. Uma série de compostos naturais ou sintéticos inibidores de AGEs têm sido descobertos e apresentados recentemente e podem representar inovação terapêutica no tratamento de modificações causadas pela a formação e acúmulo destes AGEs também na pele. Este estudo avaliou o desenvolvimento da pele reconstruída glicada e posteriormente, a avaliação da eficácia e toxicidade de compostos anti-glicação como aminoguanidina e carnosina em modelo de pele reconstruída glicada. Em perspectiva, este estudo contribuiu para o desenvolvimento de uma nova tecnologia in vitro, a pele reconstruída glicada, que auxiliará a compreensão da biologia da interação célula-MEC mimetizando processos fisiopatológicos importantes como o envelhecimento e o DM

The Advanced Glycation End Products (AGEs) of proteins is a common factor to the pathophysiology of a number of disorders related to aging and diseases such as diabetes mellitus (DM). The generation of the AGEs products on skin occurs mainly through non-enzymatic glycation reactions of the dermal extracellular matrix and has been touted as one of the factors responsible for loss of elasticity and disability of skin healing. The skin permeation of compounds is an important limitation for therapeutic/cosmetic efficacy of anti-AGE compounds, which must reach the deepest layers of the skin. Reconstructed skin model containing dermal equivalent modified by in vitro glycation is able to mimic the elderly human skin and represent an efficient model for the study of cells interactions and changes in extracellular matrix induced by aging and diabetes. The 3D reconstructed skin model has metabolic characteristics, permeability and activity similar to the original skin, reinforcing its role in drug permeability of investigations toxicity, irritation, safety and efficacy evaluation of compounds and differentiation of keratinocytes. A number of natural or synthetic AGEs inhibitor compounds have been recently discovered and displayed and can represent therapeutic innovation for the treatment of changes caused by the aging of the skin. In this study we performed the development of reconstructed glycated skin model and evaluated the efficacy and toxicity of anti-glycation compounds such as aminoguanidine and carnosine. In perspective, this study has contributed to the development of a new technology in vitro, and for the understanding cell-extracellular matrix interaction during the aging of skin

Efeito anticoccidiano de extrato hidroalcoólico de Artemisia annua em camas de aves contaminadas com Eimeria sp / Anticoccidial effect of Artemisia annua hydroalcoholic extract in poultry beds contaminated with Eimeria sp

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do extrato hidroalcoólico de Artemisia annua frente a oocistos de Eimeria sp. em camas contaminadas. O extrato foi produzido com 7 dias de percolação a 4°C, sendo posteriormente realizada a marcha fitoquímica; dosagem de fenóis totais, quantificação de artemisinina, ensaio antioxidante e teste de toxicidade. Para testar a atividade anticoccidiana, camas de aves compostas de cepilho de árvores foram contaminadas com 5000 oocistos. Foram formados quatro tratamentos, em triplicata, nos quais foram usadas diferentes concentrações, sendo G1: 12mg/mL, G2: 8mg/mL, G3: 4mg/mL e C-: água. Após a contaminação, foram aspergidos, 800 mL dos extratos nas diferentes concentrações sobre as camas e coletadas, em triplicatas, 10 cm2 de cada local, aleatoriamente, nos tempos: 0, 3, 6, 24, 48, e 72 horas após a aplicação. Nas análises fitoquímicas, foram evidenciados diversos compostos com propriedades antiparasitárias, como flavonoides e taninos. O fitoterápico continha 59,409±1,47μg/dL de artemisinina. O produto na concentração de 12mg.mL-1 apresentou eficácia entre 45,5 e 42,1%. Os resultados dos testes bioquímicos, juntamente com os encontrados no teste anticoccidiano, evidenciaram que o extrato produzido possui alto potencial para combater Eimeria sp.

The aim of this study was to determine the efficacy of hydroalcoholic extract of Artemisia annua against oocysts of Eimeria sp. in contaminated poultry beds. The extract was produced after 7 days of storage at 4°C, which was used to perform the phytochemical screening; the artemisinin measurement; the total phenolic; antioxidant testing and toxicity test. To test the anticoccidial activity, the birds space composed of shaver trees, were contaminated with 5000 oocysts. Four treatment were formed, in triplicate, were used in different concentrations as G1: 12mg/mL, G2:= 9mg/mL, G3: 6mg/mL, and C-: water. After contamination 800 mL of the herbal at different concentrations were sprayed on the bed and collected, in triplicate, 10 cm2 each site, randomly, at times: 0, 3, 6, 24, 48, and 72 hours after application. In phytochemical analysis, were shown compounds with antiparasitic properties, such as flavonoids and tannins. The herbal contained 59.409±1.47mg/dL artemisinin. The product at a concentration of 12mg.mL-1 showed efficacy from 44.25 to 40.71%. The results of biochemical tests, with the in vitro test showed that the extract has produced high potential for combating Eimeria sp.

Efeito anticoccidiano de extrato hidroalcoólico de Artemisia annua em camas de aves contaminadas com Eimeria sp / Anticoccidial effect of Artemisia annua hydroalcoholic extract in poultry beds contaminated with Eimeria sp

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do extrato hidroalcoólico de Artemisia annua frente a oocistos de Eimeria sp. em camas contaminadas. O extrato foi produzido com 7 dias de percolação a 4°C, sendo posteriormente realizada a marcha fitoquímica; dosagem de fenóis totais, quantificação de artemisinina, ensaio antioxidante e teste de toxicidade. Para testar a atividade anticoccidiana, camas de aves compostas de cepilho de árvores foram contaminadas com 5000 oocistos. Foram formados quatro tratamentos, em triplicata, nos quais foram usadas diferentes concentrações, sendo G1: 12mg/mL, G2: 8mg/mL, G3: 4mg/mL e C-: água. Após a contaminação, foram aspergidos, 800 mL dos extratos nas diferentes concentrações sobre as camas e coletadas, em triplicatas, 10 cm2 de cada local, aleatoriamente, nos tempos: 0, 3, 6, 24, 48, e 72 horas após a aplicação. Nas análises fitoquímicas, foram evidenciados diversos compostos com propriedades antiparasitárias, como flavonoides e taninos. O fitoterápico continha 59,409±1,47μg/dL de artemisinina. O produto na concentração de 12mg.mL-1 apresentou eficácia entre 45,5 e 42,1%. Os resultados dos testes bioquímicos, juntamente com os encontrados no teste anticoccidiano, evidenciaram que o extrato produzido possui alto potencial para combater Eimeria sp...

The aim of this study was to determine the efficacy of hydroalcoholic extract of Artemisia annua against oocysts of Eimeria sp. in contaminated poultry beds. The extract was produced after 7 days of storage at 4°C, which was used to perform the phytochemical screening; the artemisinin measurement; the total phenolic; antioxidant testing and toxicity test. To test the anticoccidial activity, the birds space composed of shaver trees, were contaminated with 5000 oocysts. Four treatment were formed, in triplicate, were used in different concentrations as G1: 12mg/mL, G2:= 9mg/mL, G3: 6mg/mL, and C-: water. After contamination 800 mL of the herbal at different concentrations were sprayed on the bed and collected, in triplicate, 10 cm2 each site, randomly, at times: 0, 3, 6, 24, 48, and 72 hours after application. In phytochemical analysis, were shown compounds with antiparasitic properties, such as flavonoids and tannins. The herbal contained 59.409±1.47mg/dL artemisinin. The product at a concentration of 12mg.mL-1 showed efficacy from 44.25 to 40.71%. The results of biochemical tests, with the in vitro test showed that the extract has produced high potential for combating Eimeria sp...

Alternative methods in toxicity testing: the current approach

Alternative methods are being developed to reduce, refine, and replace (3Rs) animals used in experiments, aimed at protecting animal welfare. The present study reports alternative tests which are based on the principles of the 3Rs and the efforts made to validate these tests. In Europe, several methodologies have already been implemented, such as tests of irritability, cell viability, and phototoxicity as well as in vitro mathematical models together with the use of in silico tools. This is a complex process that spans from development to regulatory approval and subsequent adoption by various official entities. Within this regulatory framework is REACH, the European Community Regulation for chemicals and their safe use. In Brazil, the BraCVAM (Brazilian Center for the Validation of Alternative Methods) was recently established to validate alternative methods and stimulate incorporation of new methodologies. A new vision of toxicology is emerging for the 21st century (Tox-21), and the subsequent changes are shaping a new paradigm.

Métodos alternativos estão sendo desenvolvidos para a redução, o refinamento e a substituição (3R) do número de animais utilizados em experimentos, visando ao seu bem-estar. Esses testes alternativos baseiam-se no princípio dos 3R e esforços têm sido empregados para que sejam validados. Na Europa, diversas metodologias já foram implantadas tais como: testes de irritabilidade, testes de viabilidade celular, testes de fototoxicidade e modelos matemáticos in vitro, além do uso de ferramentas in silico. Esse é um processo complexo, que abrange desde o seu desenvolvimento até a aceitação regulatória e posterior adoção por diversas organizações oficiais. No contexto regulatório está o REACH, o Regulamento da Comunidade Européia, para produtos químicos e sua utilização segura. No Brasil, o BraCVAM (Centro Brasileiro de Validação de Métodos Alternativos) foi recentemente estabelecido para validação de métodos alternativos e estímulo à incorporação de novas metodologias. Uma nova visão de toxicologia vem surgindo para o século XXI (Tox-21) e as mudanças ocasionadas promoverão um novo paradigma.

Validación de métodos alternativos para análisis microbiológico de alimentos y aguas / Validation of alternative methods for the microbiological analysis of food products and water

El empleo de métodos microbiológicos alternativos para la detección de microorganismos es una herramienta importante para garantizar la inocuidad de alimentos y aguas. Numerosos y diversos métodos alternativos para microbiología se comercializan actualmente gracias a avances recientes, sobre todo en el campo de la biotecnología. Para que un nuevo método microbiológico sea aceptado, su fabricante debe demostrar su adecuación. En una primera revisión, se realizó el análisis de los principales parámetros determinados en la validación de los métodos microbiológicos cualitativos. El objetivo de esta segunda parte consiste en abordar los indicadores más importantes a considerar para los métodos microbiológicos cuantitativos

The use of alternative microbiological methods for the detection of microorganisms is an important tool to ensure the safety of food products and water. A large number of alternative microbiological methods are currently available on the market, thanks to recent advances mainly in the field of biotechnology. In order for a new microbiological method to be accepted, its manufacturer must prove its adequacy. In a first review, an analysis was made of the main parameters determined for the validation of qualitative microbiological methods. The purpose of this second part is to approach the most important indicators to be considered for quantitative microbiological methods

Estudo da segurança de cosméticos: presente e futuro / Study of the safety of cosmetics: present and future

Cosméticos são usados pelo homem desde a antiguidade e, atualmente, o consumo tem aumentado muito, inclusive no Brasil, o terceiro maior mercado no mundo. Assim sendo, a preocupação com a segurança e eficácia destes produtos deve ser intensificada, mesmo sendo produtos raramente relacionados a reações adversas que causem danos à saúde. Para a avaliação das possíveis reações que podem ser apresentadas pelos produtos (irritação, sensibilização, efeitos sistêmicos), a Legislação Brasileira exige que os fabricantes avaliem a segurança e eficácia de seus produtos. Para este fim, em geral, são utilizados animais como modelo experimental o que está sendo cada vez mais evitado, acarretando a pesquisa por métodos alternativos para estas avaliações, que não necessitem de modelos experimentais in vivo. Desta forma, a presente revisão tem por objetivo apresentar os principais ensaios biológicos utilizados para avaliação da segurança de cosméticos, bem como ensaios in vitro que os substituam.

Cosmetics have been used since ancient times and, recently, their consumption has increased greatly in many countries, including brazil, which is the third largest consumer market in the world. Thus, concern for the safety and efficacy of these products should be heightened, even though these products are rarely related to adverse reactions that damage the health. Brazilian law requires manufacturers to subject their products to safety testing, to assess the possible reactions that could be caused by them (irritation, sensitization, systemic effects). To this end, in general, animals have been used as the experimental model, but this practice is being increasingly controlled, so that the scientific community is looking for alternative tests that do not require experimental in vivo models. Thus, this review aims to describe the main biological assays used to assess the safety of cosmetics, as well as in vitro assays that can replace them.

Ensaios da membrana cório-alantoide (HET-CAM e CAM-TBS): alternativas para a avaliação toxicológica de produtos com baixo potencial de irritação ocular / Chorioallantoic membrane assays (HET-CAM and CAM-TBS): alternative tests for performing toxicological evaluation of productswith low potential for ocular irritation

O presente estudo analisou o potencial preditivo de dois modelos que utilizam a membrana cório-alantoidede ovo embrionado de galinha (i.e. o HET-CAM e sua versão modificada, o CAM-TBS, que quantifica os danos à membrana por meio da absorção do corante azul trypan), como estratégia para a implementação de alternativas aos testes in vivo de avaliação de toxicidade ocular. Vinte colírios foram avaliados in vivo por meio do teste de irritação ocular de Draize e por ensaios in vitro utilizando-se testes HET-CAM eCAM-TBS. Todos os colírios foram classificados como não irritantes pelo teste in vivo. No ensaio HETCAM, foram observados 4 resultados falso-positivos, e o teste apresentou especificidade e precisão de 80%. O CAM-TBS demonstrou melhor desempenho, pois a especificidade e a precisão foram de 100%. O ponto de corte adotado (cut-off = 0,9) no HET-CAM é discutido, uma vez que os resultados falso-positivos observados no presente estudo poderiam ter sido contornados caso a categoria “não irritante” englobasse produtos “não irritantes” e “irritantes leves”, à semelhança do critério preconizado para o CAM-TBS (cutoff= 7,0).

Validación de métodos alternativos para análisis microbiológico de alimentos y aguas. cualitativos / Validation of alternative methods for microbiological analysis of foods and water. Qualitative methods

Internacionalmente han aumentado las exigencias para la adopción de nuevos métodos microbiológicos para el análisis de aguas y alimentos. Estos son adoptados cuando ofrecen rapidez, menor laboriosidad, son más sencillos, entre otras ventajas. Para lograr este objetivo, es necesario demostrar su fiabilidad y la equivalencia en relación con los métodos tradicionales existentes. En Cuba esta temática es relativamente incipiente, por lo tanto, resulta oportuno realizar una revisión bibliográfica sobre esta materia. El objetivo de esta primera revisión consiste en abordar los parámetros más significativos relacionados con la validación de métodos microbiológicos cualitativos alternativos.

Internationally the demands for the adoption of new microbiological methods for the analysis of waters and foods have increased. These are adopted when they are high-speed, less laborious, more easy, among other advantages. To achieve this objective, it is necessary to demonstrate their reliability and the equivalence according to the existent traditional methods. In Cuba this topic is relatively incipient, therefore it is appropriate to carry out a review on this matter. The objective of this first revision consists on approaching the more significant parameters related with the validation of alternative qualitative microbiological methods.

Alternativas ao uso de animais como recurso didático / Alternatives for the use of animals as a didactic resource / Alternativas al uso de animales como recurso didáctico

A utilização de animais como recurso didático no ensino superior tem sido muito discutida. Tal fato se deve em função de muitos alunos e professores consideram que essas práticas vão contra seus pressupostos éticos e morais, além dos problemas de ordem psicológica que estas podem ocasionar. O debate acerca desse assunto tem aumentado muito nas últimas décadas, enquanto grupos de proteção aos animais têm tentado e conseguido com sucesso convencer muitas universidades pelo mundo a abolirem a utilização de animais de laboratório com fins didáticos, ou restringirem o seu uso ao mínimo necessário. Porém, para que animais deixem de ser utilizados para essa finalidade, torna-se necessária uma busca por recursos alternativos que propiciem aprendizado eficiente e satisfatório. Estes existem e incluem cadáveres e tecidos animais obtidos de fontes éticas; vídeos que podem ser gravados em situações reais; modelos, manequins e simuladores; multimídia; trabalho clínico com pacientes animais; auto-experimentação; laboratórios in vitro; estudos de campo e aprendizado baseado em casos. Vários estudos comprovam a eficácia do aprendizado proporcionado por tais métodos. Com relação ao custo de implantação, embora este possa ser maior no início, acaba por torná-los economicamente viáveis, por reduzir custos com a manutenção de animais em biotérios, anestésicos e outros medicamentos. Assim, é possível concluir que a utilização de métodos alternativos ao uso nocivo de animais é ética, eficaz e economicamente viável.

The use of animals as a didactic resource by universities has been very controversial. Such controversy comes from many students and professors who consider that these practices are against their ethical and moral principles, as well as the problems of psychological order they may cause. The debate over this subject has been increasing over the past few decades, while groups of animal protection have tried and successfully managed to convince many universities worldwide to abolish the use of laboratory animals with educational purpose, or restrict their use to the minimum necessary. However, in order to stop using animals for this purpose, a search for alternative materials which provide efficient and satisfactory learning becomes necessary. Such alternatives already exist and include bodies and animal tissues obtained from ethical sources; videos which can be obtained in real situations; models, mannequins and simulators; multimedia simulation; clinical work with animals; self experimentation; in vitro laboratories; field studies and learning based in cases. Several studies prove the efficacy of the learning provided by alternative methods. Besides, the implementation cost, although higher in the beginning ends up making the alternatives economically feasible since they reduce the costs with maintenance of animals, anesthetics, and other remedies. Thus, it is possible to conclude that the use of alternative methods to the harmful use of animals is ethical, efficient and economically feasible.

Mucho se ha discutido sobre la utilización de animales como recurso didáctico en la educación superior. Esto ocurre en función de muchos estudiantes y profesores que consideran que estas prácticas van contra sus principios éticos y morales además de los problemas psicológicos que éstos pueden causar. La discusión referente a este tema ha aumentado mucho en las últimas décadas, mientras que los grupos de protección a los animales han intentado y han obtenido con éxito convencer a muchas universidades en el mundo que supriman el uso de animales de laboratorio con la finalidad didáctica, o restrinjan su uso al mínimo necesario. Sin embargo, de modo que los animales dejen de ser utilizados para este propósito es necesaria una búsqueda de materiales alternativos que tornen el aprender eficiente y satisfactorio. Éstos existen e incluyen los cadáveres y los tejidos animales obtenidos de fuentes éticas; películas y videos que se pueden registrar situaciones verdaderas; modelos, maniquíes y simuladores; multimedias; trabajo clínico con los pacientes animales; auto-experimentación; laboratorios in vitro; estudios del campo y aprender basados en casos. Algunos estudios prueban la eficacia del aprender proporcionado por estos métodos. Por otra parte, el coste de la implantación, aunque grande al principio se vuelve económicamente viable por reducir gastos con el mantenimiento de animales en bioterios, anestésicos y otras medicinas. Así, es posible concluir que el uso de métodos alternativos al uso dañoso de animales es ético, eficiente y económicamente viable.